Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩大

从第一次消失肝细胞自身抗躯到消失1改进型高血压流行病学征状的十分困难率在青极少年时期就有很好的描绘出，多个肝细胞自身抗躯阴性的青极少年中都有70%在血清变换后10年中都患上高血压，而随访15年的青极少年这一数量减极少到84%。相比之下，占流行病学1改进型高血压一半以上的改进型1改进型高血压的发病机制还不会取得充分的数据归纳。

越来越多的人开始运用于仍须子系统来定义1改进型高血压的十分困难：个躯在消失多种肝细胞自身抗躯时转回第1过渡期，消失血糖异常时转回第2过渡期，消失征状时转回第3过渡期。一些多发肝细胞自身抗躯阴性的个躯，在1期和2期，十分困难快速，并发展为发病的1改进型高血压。我们之前描绘出了两组在首次探测到多种肝细胞自身抗躯结果显示后有数10年无高血压的太快十分困难者，这组病症人数极少，但外观上颇为指明。随后，我们发现肝细胞自身抗原选择性CD8+T细胞内重排在十分困难极快的病症中都基本不依赖于，但在全面性发病和近十年依赖于的高血压病症中都很容易探测到。这有可能表明，与十分困难病症相比，这些病症自身免疫重排的调节强化。

早期数据归纳表明，尽管调节性T细胞内(Treg)数量正常，但高血压病症依赖于一些功能缺陷，其中都仅限于对IL-2的重排能力减少。此外，高血压病症中都的现像CD4+T细胞内有可能对调节格外具抵抗性，乏善可陈为现像T细胞内的可抑制消散，自然地转化成的Treg和躯外转化成的诱发Treg，以及抗原境况的CD4+T细胞内中都IL-2重排消散。本数据归纳的用以是描绘出了CD4+调节性T细胞内(Treg)在一个大极极快十分困难者中都的外观上，他们的岁数为43岁(31-72岁)，随访一段时间为18-32年。

新方法：BOX数据归纳是一项以社群为基础的侧向数据归纳，在21岁以下确诊的病症亲属中都检查1改进型高血压的危险心理因素。我们之前描绘出了近十年极快十分困难者的外观上，他们保持多重肝细胞自身抗躯阴性超过10年，但不会消失高血压的流行病学征状，慢性或非顺利完成性自身免疫。随后，10名继续保持无高血压并愿意提供大量血液结果显示的极快十分困难者纳入T和B细胞内功能归纳。在目前的数据归纳中都，8名慢十分困难者(SP组)，中都位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此间的肝细胞自身抗躯阴性。所有的参与者都位处1改进型高血压十分困难的1期，尽管一些人随后得不到了肝细胞自身抗躯对某些抗原的阴性重排，然而，一名病症已经位处2期有数6年，但不会消失流行病学征状，一名病症被病患为高血压，该成年人72岁，在采集试验中都结果显示时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳中都对该供躯顺利完成了原则上评估。分离外周血单个重排器细胞内(PBMCs)，采行多参数流式细胞内术和T细胞内可抑制试验评估供躯中都Treg的阈值、表改进型和功能。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴别、表征和回归)顺利完成无监督聚类归纳，评估Treg表改进型。

结果：与健康供躯相比，来自慢十分困难躯的心灵CD4+T细胞内的监督聚类推测，激已逝的心灵CD4+ Treg阈值减极少，与糖皮质激素诱发的TNFR涉及细胞(GITR)表达出来减极少有关。一名HbA1c升高的病症与十分困难极快者和归一化的折衷组相比，Treg谱有所相异。功能归纳表明，与健康供躯相比，来自极快十分困难躯的Treg激活的CD4+现像T细胞内可抑制明显受损。乏善可陈为对现像CD4+T细胞内CD25和CD134表达出来的可抑制减极少。

布1 深入的表改进型归纳推测，CD4+Treg亚改进型在慢十分困难表头中都减极少。由FlowSOM生成的Treg室，聚集在来自所有供躯的已逝CD4+CD45RA -细胞内上。根据标示物表达出来鉴别出10个元簇:心灵T细胞内_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T细胞内;HLA-DR + GITR +心灵T细胞内;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)运用于9个相异Treg标示生成的10个元簇的MST。每个结点象征性一个空降兵(100个空降兵)，格外大的元空降兵(10个元空降兵)在结点组周遭上色。每个结点中都的煎饼布指出单个标示的表达出来档次。(b)每个元聚类的热布，以推测整躯标示表达出来。(c, d)为HD组(c)和SP组(d)生成布，以及FlowSOM识别子系统的每个元簇的覆盖层。(e-l)比起总质量为每个metacluster木箱线或布(总质量> 0.05%)确定为HD和SP组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T细胞内(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T细胞内(l)。橘色红色象征性**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon选取小写秩核查。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 运用于CITRUS的预测模改进型证实，Treg阈值的减极少是十分困难极快的徽标。分级门控(a - f)和棉花归纳(g-k)比较SP参与者和归一化的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)互补CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群躯的象征性性布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表达出来顺利完成分离，建模FlowSOM群躯。(b) HD(黑点)和SP(星点)组以及供躯SP 606(橘色)中都CD25+ cd127的阈值概要布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控闭包的木箱线或布;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)果树簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达出来强度制做，箭头突出的簇被识别子系统为SP和HD表头彼此间的相异。(j)木箱线或布推测了在SP(星点)和HD(灰点)组中都，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的比起总质量(数量)。(k)直方布推测每个簇的表改进型(深蓝色)和Treg标示比起表达出来与氛围表达出来(深蓝色);上列，闪存Treg_3;请注意即刻，闪存Treg_4。氛围与所有其他簇中都标示的表达出来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon选取小写秩核查

布3 与健康献血者相比，十分困难极快者心灵treg的GITR减极少。每个心灵CD4+T细胞内元簇(心灵T细胞内_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T细胞内;HLA-DR + GITR +心灵T细胞内;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)探测每个表达出来标示的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)表头的表达出来热布(sp606不仅限于在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇中都所有HD(白色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR表达出来串联，推测直方布(c)和概要布(d)。Wilcoxon选取小写秩和核查，p< 0.07(橘色)所有供躯仅限于，p< 0.05(深蓝色)供躯SP 606和归一化的HD不仅限于在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR表达出来，从分级门控，从所有HD(白色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(橘色)串联，推测直方布(e)和概要布(f) *p< 0.05, Wilcoxon选取小写秩核查

布4 来自极快十分困难的CD4+ treg细胞内掌控现像CD4+T细胞内的能力减少。SP组用深蓝色的线或和红色指出，HD组用黑色的线或和红色指出，橘色的线或/红色指出供躯sp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内顺利完成分选。CD4+CD25−(这样的话者)被标示为CFSE, Treg按观察的数量氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠增殖细胞内，人才3天后顺利完成流式细胞内术探测。(a-d)与CD4+这样的话者比起应当的treg人才(自躯)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者人才。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE可抑制比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制比率。运用于阴性折衷(激已逝的组织起来细胞内不含treg)计算可抑制比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

布5 现像CD4+T细胞内对极快十分困难的T细胞内增殖的可抑制格外敏感。SP组用深蓝色的线或和红色指出，HD组用黑色的线或和红色指出，橘色的线或/红色指出供躯sp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内顺利完成分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel标示，treg按观察的数量氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠增殖细胞内，人才3天后顺利完成流式细胞内术(CD25反染)和细胞内因子归纳。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者携手人才。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE可抑制三份(b)。(c,d) CD25可抑制三份(c)和CD134可抑制三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才中都的表达出来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出结论的结论是，来自极快十分困难子的增殖心灵CD4+Treg在GITR表达出来中都取得了扩展和独特，强调了进一步数据归纳Treg在1改进型高血压风险个躯中都的异质性的不足之处。

译文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28